为什么构建质粒,质粒是如何构建的？

网友回答

质粒存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，是细胞染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子。可用于基因工程中目的基因的运载体。构建质粒可以在新的生物中正常表达

网友回答

因为高拷贝质粒稳定性低，而且给宿主细胞的压力大。
　　低拷贝数的质粒DNA在宿主细胞分裂前只能复制1～2次，而多拷贝数质粒可以在细胞分裂前复制成10～200拷贝。
　　高拷贝数的质粒称为松弛型质粒(relaxed plasmid)，独立于细菌细胞而自主复制；低拷贝数的质粒一般是严紧型质粒(stringent plasmid)，它们的复制随细菌染色体的复制同步进行。
　　一般来说，外源基因的表达量随拷贝数的增加而提高，但是当拷贝数很大时，拷贝数与发酵目标产物产率的这种关系却不存在。这主要有两方面的原因：一方面，高拷贝数时外源基因的表达量不再由质粒的拷贝数决定，可能是由转录和翻译水平决定的；另一方面，高拷贝数的质粒往往很不稳定。由于质粒拷贝数的变化直接与基因目标产物的产率有关，因此对于重组蛋白的生产来说，质粒的拷贝数是一个非常重要的参数。
　　而且同一个细胞里一般不会同时有两种不同的质粒，这是质粒不相容性(plasmid inpatibility)。在细菌细胞增殖过程中，其中必有一种会被逐渐排斥。所以要用纯化过的低拷贝质粒。
　　低拷贝在鸟枪法测序中很常用的。
　　随机测序战略又称鸟枪战略(shotgun strategy),此策略是将人 类基因组DNA用机械方法随机切割成2Kb左右的小片段,把这些DNA片段装入适当载体,建 立亚克隆文库,从中随机挑 取克隆片段.最后通过克隆片段的重叠组装确定大片段DNA序列.