硫酸铵分级沉淀法是谁发明的,为了什么发明的,求助:酶的硫酸铵沉淀

发布时间:2020-07-10 13:45:20

硫酸铵分级沉淀法是谁发明的,为了什么发明的,求助:酶的硫酸铵沉淀

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硫酸铵可能会损坏某些蛋白。加入硫酸铵晶体时应小心:局部浓度过高可能会造成不需要的蛋白沉淀。对于常规可再生的纯化过程,可以避免使用硫酸铵沉淀以利于层析。通常沉淀对于浓度低于1mg/ml的蛋白几乎无效。沉淀所需溶液:饱和硫酸铵溶液(在100ml蒸馏水中加入100g硫酸铵,搅拌溶解)。1MTris-HCl,pH8.0用于第一步纯化的缓冲液。方法:1,过滤(0.45μm膜)或离心样品(4°C10000g)。2,每10倍体积的样品中加入一倍的1MTris-HCl,pH8.0以维持pH值。3,温和搅拌。逐滴加入硫酸铵溶液,最高至50%饱和度。搅拌1小时。4,10000g离心20min。5,去除上清,用等体积相同浓度的硫酸铵溶液(如不能溶解沉淀也不会造成进一步沉淀的溶液)洗涤重悬沉淀两次。再次离心。6,使用少量体积后面步骤所需的溶液溶解沉淀。7,硫酸铵在净化/更换缓冲液步骤中使用脱盐柱除去。

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1、硫酸铵浓度的计算就根据硫酸铵饱和度表来计算,比如60%的硫酸铵就是指体系中硫酸铵的浓度达到同温度下硫酸铵饱和浓度的60%,这个和硫酸铵的摩尔浓度没有关系。
  2、直接根据饱和度表在蛋白溶液中加入适当重量的固体硫酸铵即可。
  3、硫酸铵的饱和度随着温度有少许变化:
  0度时,每升水可以溶解706.96克硫酸铵(此时重量百分比为41.42%,摩尔浓度为5.35 mol/L,比重1.2428g/cm3)。
  25度时,每升水可以溶解769.05克硫酸铵(此时重量百分比为43.46%,摩尔浓度为5.82 mol/L,比重1.2449g/cm3)
  至于从某一硫酸铵浓度调节到另一浓度,许多生化手册可以查到表,免去自己计算可能的不准确。
  例如:《生物化学制备技术》苏拔贤主编(科学),第58页、59页两个表分别为在25度和0度进行硫酸铵沉淀的表。
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