请问PCR引物浓度是如何设定的,pcr反应体系中引物浓度20uM指的是什么,还有20微升体系
网友回答
>>> 一般都稀释成应用液,常用浓度是10uM/L也就是10pM/L.这样的话,20ul体系加1ul,50ul体系加2ul,方便使用!至于引物会不会降解的问题,估计高浓度比低浓度保存时间长说法是对的。但是,通常引物在20度放半年都没有问题,如果不是经常用,可以先取出一部分来用,其余都放-80度保存,可以放很久。引物稀释很简单,一般装引物的管子上都标有引物的量如3.6nM,你直接往管中加360ul的无菌双蒸水溶解就可以了 ,在加水之前要先高速离心管子几分钟,加水后要高速漩涡混匀几分钟就可以用了。
网友回答
20uM引物浓度指得是引物working solution的浓度。也就是说,当你从装有引物的管内,吸取一定量,加入到PCR master mix配成反应混合液的时候,这个引物管内的浓度是20uM。如果1ul的这个浓度引物加入到50ul反应中,引物终浓度将是0.4uM。
实际反应体系中的引物最终浓度最常见是0.5uM,也可在0.1-0.5uM之间选取。
20ul体系换算成50ul体系,最简单就是每种要加的试剂或水体积分别乘2.5, 浓度不变即可。