培养细菌、真菌的一般方法中，正确的操作顺序是①配制培养基②接种③高温灭菌冷却④恒温培养A.①②③④B.②①③④C.④③①②D.①③②④

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D解析试题分析：细菌和真菌的生活需要一定的条件，如水分、适宜的温度、还有有机物，因此首先要配制含有营养物质的培养基，可以用牛肉汁加琼脂熬制，然后把培养基和所有用具进行高温灭菌，以防杂菌对实验的干扰，为防止高温杀死细菌、真菌，要等冷却后，再进行接种，接种后放在温暖的地方进行恒温培养，故D符合题意。考点：本题考查的是培养细菌、真菌的一般方法，意在考查学生进行实验的操作能力，解答此题需要熟记细菌、真菌的培养方法。