请问菌落PCR有条带不亮但是分子量正确抽出的质粒分子量却在空载体附近是为何？

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通用引物加特异性引物菌落PCR+质粒双酶切 均为阳性 是最具特异性的证明（无缝拼接的除外）个人认为双酶切实验能够更严谨的验证重组实验 更具说服力的是基因组测序不知道您的重组质粒是否酶切解环后与线性空载体进行比对 因为琼脂糖凝胶电泳本身存在一定范围内误差 若目的片段过小 立体DNA结构在琼脂糖凝胶中误差放大 可能影响实验结果根据您的实验结果 我猜测重组质粒阴性可能性更大一些既然已经抽提质粒 不妨做一下质粒PCR和双酶切 样品在一块凝胶内平行跑样结果一目了然