SDS-PAGE测定蛋白质分子量的基本原理是什么?简述一下主要步骤

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蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。1967年Shapiro等人发现，如果在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS)，大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合，即每克蛋白质结合1.4g的SDS-复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而消除了蛋白质原有的电荷差别，使蛋白质分子电泳的迁移率主要取决于本身的分子量，而与蛋白质所带的电荷无关，在一定条件下，蛋白质的分子量的对数与电泳迁移率间呈负相关。操作步骤1、凝胶制备:用两块电泳玻璃板制成垂直板槽(不能漏胶)，垂直放置。将配制好的分离胶溶液倒入，滴加入无离子水，待凝胶聚集后，倒出无离子水，用吸水纸吸干，倒入浓缩胶，再插入梳子。2、上样:分别取样品若干ml于离心管中，按1/1~1/5比例加入5×样品缓冲液，再沸水浴中加热3~5min，取出待用。用微量注射器分别吸取不超过30μl不同浓度的标准蛋白样品和试验样品注入样品槽。点样结束后，调节电泳仪电流到10mA(2~3mA/em)，保持电流稳定不变，当溴酚蓝迁移到离分离胶底1~2cm时，即可停止电泳。3、染色:电泳完毕后，取出凝胶板，浸入染色液中，在37℃温箱中保温过夜。倒掉染色液，24h后，即可看到清晰的蛋白质条带。