关于CHO细胞的培养方法 生物
网友回答
【答案】 CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞）培养方法（正统法）
CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞）培养方法（正统法）
※准备
??DMEM培养基
??PBS(-)
??Trypsin（0.25％）
??MTX（100μM）
??移液管
??自动移液枪
??废液缸
※培养基量
25c㎡??‥‥5ｍl
75c㎡??‥‥10ｍl
※操作顺序
①把培养瓶内的培养基用5ml的移液管转移到保存用的离心管里.
②用培养液量的1/2的PBS（25ml‥2.5ml）清洗细胞表面（2次）.
③再用培养液量的1/10的（25ml‥0.5ml）的胰酶冲洗细胞表面
④再CO2培养厢里静置5分钟.（利用这段时间,准备好15ml的大离心管,并也好标签做好记号.）
⑤物理方法处理,（敲击培养瓶两侧）是细胞脱离,再用显微镜确认是否完全脱离.
⑥加入等倍量的（25ml‥5ml）培养基,充分冲洗培养瓶内表面,在连同细胞全部转移到大离心管中.
⑦离心分离（1,000rpm、4℃、10min）.（这段时间准备新的培养瓶,按照9/10的量（25ml‥4.5ml）,加入培养液准备好.加入MTX的同时加入.）： 50nMMTX:2.5ulof100uM/final5ml培养液（这期间,要在培养瓶表面写上细胞培养的诸多条件和细胞的种类等等.）
⑧离心分离后,为了避免沉淀细胞扩散到溶液里,要迅速将上清用吸管吸除.
⑨加入培养液(DMEM+FBS,25ml‥5ml),用移液管充分混匀细胞.
⑩按1/10量,（25ml‥0.5ml）将细胞悬浊液注入新培养瓶中.
??在CO2培养厢中37度条件下培养.培养液总量为5ｍｌ
注：使用的移液管为培养专用玻璃移液管,在上面吸口处,塞上棉花经过干热灭菌的.干热条件：180℃、3小时.
CHO细胞培养：
CHO细胞株置于RPMI1640培养基中,内含10%灭活小牛血清,青霉素100IU/mL,链霉素100IU/mL,置于37℃,5%CO2的培养箱（德国Heraeus）中培养.每隔48h换培液,当单层培养细胞汇合以后,用0.25%胰蛋白酶消化,传代培养.将培养瓶中的CHO细胞按1×105/mL传代移入培养板中,待进入对数生长期后（约24h）加药.
这是细胞的供给源:
CHO细胞由中科院上海生物化学和细胞生物学研究所提供.
这是我对此细胞的看法:
1.CHO细胞主要来源于中华仓鼠卵巢细胞.
2.与3T3(鼠纤维细胞)293(HEK)COS(猴肾细胞)HepG2(人肝细胞)C2C12(鼠肌细胞)Hl5(昆虫)AFT024(鼠基质细胞)一起,是重组DNA的主要载体细胞,常见于基因工程.
3.培养基可有多种选择,一般用RPMI1640培养基或DMEM培养基.