很想知道质粒构建的详细步骤?最近跟着师姐在做,但是觉得很混乱! 生物
网友回答
【答案】 1. 通过PCR扩增目的基因片段
PCR要设计引物,设计引物时要选择合适的同源序列,根据质粒载体和基因序列要选择合适的酶切位点,PCR的产物要纯化.
2. 酶切
根据引物设计的酶切位点,分别对PCR产物和质粒载体进行酶切,酶切后的产物也要进行回收
3. 连接
通过连接酶将酶切后的PCR产物和质粒载体进行连接
4. 转化
将连接产物转化到受体菌中（一般为DH5a）,涂板,培养过夜
5. 挑取单克隆,并鉴定
挑去平板上的单克隆培养,可以通过PCR或者酶切初步鉴定阳性克隆,对初步鉴定出来的阳性克隆进行测序