聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)原理是什么?
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【答案】 聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacryamide gel electropHoresis,PAGE)是由丙烯酰胺单体和交联剂甲叉双丙烯酰胺在催化作用下形成的三维网状结构物质.在不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳中,凝胶的制作是分层进行的,因此凝胶不仅有分子筛效应,还具有浓缩效应.和琼脂糖凝胶相比,聚丙烯酰胺凝胶难于制备和处理.它们的分离范围较窄.但是它们也有突出的优点,由于是不连续的pH 梯度,故样品被压缩成一条狭窄的区带,因而增强了分离效果,提高电泳分辨率.尤其对小DNA 片段的分析(5～500bp).在这一范围内,仅差1bp 的DNA 分子也能清晰地分开.其次,DNA 纯度很高.从聚丙烯酰胺凝胶中得到的DNA 纯度很高以致于下步操作不用任何处理.还有,它的负载容量高.该胶的标准加样槽中可以加入高达10mL 的DNA 样品,而不影响电泳分辨率.多应用于分离纯化和鉴定大小为5～500bp 的DNA 片段.聚丙烯酰胺凝胶电泳有连续与不连续体系两种,前者指在整个电泳体系中的缓冲液pH 值和凝胶孔径大小相同,主要用于核酸分析.后者主要用于蛋白质样品的分离,它除了电泳槽中的缓冲体系和pH 值与凝胶中不同外,凝胶本身也由缓冲体系、pH 值和凝胶孔径不同的两种凝胶堆积而成.