做突变时为何要用PNK酶把引物磷酸化在做定点突变或者序列插入之类的时候为什么要将引物的5’端磷酸化呢?本人是新手希望能得到大家的帮助,是因为如果不磷酸化的话，后面连接就连不上吗？如果把PCR产物直接转到感受态细菌的话是不是就不用连接酶了？也不用这样磷酸化了，多谢给予指导
网友回答
【答案】 不知道你是用什么方法做的
我们一般有两种方法做点突变
而且都不用磷酸化的
一种是搭桥法
这种方法用pcr把突变的基因片段拉出来
然后连进载体
还有种方法
就是直接pcr在质粒拉一圈
这种方法用DpnI消化模板后
直接转化就好了
两种都不要磷酸化