发布时间：2019-08-26 13:03:35
微生物菌体浓度的测定方法：
活菌计数法
此法能准确地判断菌液浓度,但有明显的滞后性,无法在第一时间内2确定其实际浓度,待结果出来后,再开始检测,菌的活性将有所下降,给实验室操作带来诸多不便;
比浊法
此法能快速地判断菌液浓度,但为粗略的估计值,受限于各人肉眼的观察,误差较大,准确性不高。
微生物菌体浓度的测定（纤维制品的抗菌性试验方法为例）
一、菌种：
大肠杆菌(EscherichiacoliATCC8099)
二、试剂与仪器
蛋白胨
牛肉膏
氯化钠
Cary100紫外——可见光分光光度计
三、培养基
营养细菌培养基NB。
蛋白胨5g,牛肉膏粉3g,蒸馏水1000mL,pH6.8±0.2。
营养琼脂培养基NA。
蛋白胨5g,牛肉膏粉3g,琼脂粉15g,蒸馏水1000mL,pH6.8±0.2。
1、对数生长期菌液的制备
取在规定保存代数之内的供试菌种,在火焰旁,挑取一铂金环,在营养琼脂培养基上划线,于37℃±1℃培养24h后,在平板上挑取饱满的单菌落,置于20mL营养细菌培养基中,振荡(110r/min,振幅3cm)培养24h。
2、稳定期菌液的制备
取培养好的对数生长期菌液0.4mL,于20mL营养细菌培养基中,再振荡培养4h,即为稳定期菌液。
四、吸光度(ABS值)的测定
取培养好的稳定期菌液,按不同的设定稀释倍数(5、10、20、40倍),依次进行稀释,(稀释液为1/20NB),在660nm标准波长下,测得一组不同菌液浓度的吸光度。(用空白1/20NB进行测试前调零)。
五、活菌计数
在无菌室内火焰旁进行操作。分别依次测定四个不同稀释倍数的菌落数。每个稀释倍数依次制定几个浓度梯度,用灭菌吸管各吸取1mL注入平皿。注入约15mL,45～50℃的营养琼脂培养基,随即转动平皿,使样品与培养基充分混合均匀,待培养基凝固后,翻转平皿,置37℃±1℃培养箱内培养24h后,进行菌落计数。用肉眼观察,点出菌落数,记下各平皿的菌落数后,
求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。
六、标准曲线的制作
运用生物统计ORG数据分析软件,以吸光度ABS值为横坐标,稳定期的菌液浓度为纵坐标绘制标准曲线。