四大色谱原理是什么？

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色谱类 按两相物理状态：气相色谱(GC)液相色谱(LC)气相色谱适用于离挥发性化合物GC根据固定相同气固色谱(GSC)气液色谱(GLC)其GLC应用广液相色谱适用于离低挥发性或非挥发性、热稳定性差物质LC同液固色谱(LSC)液液色谱(LLC)外超临界流体色谱(SFC)超临界流体（界于气体液体间种物相）流相（用CO2）其扩散系数能快达平衡故析间短特别适用于手性化合物拆 按原理吸附色谱(AC)、配色谱(DC)、离交换色谱(IEC)、排阻色谱(EC称筛、凝胶滤(GFC)、凝胶渗透色谱(GPC）亲色谱,外电泳按操作形式纸色谱(PC)、薄层色谱(TLC)、柱色谱四、色谱离原理 高效液相色谱按离机制同液固吸附色谱、液液配色谱（相与反相）、离交换色谱、离色谱及排阻色谱 1．液固色谱　 使用固体吸附剂离组色谱柱离原理根据固定相组吸附力同离离程吸附－解吸附平衡程用吸附剂硅胶或氧化铝粒度5~10μm适用于离量200~1000组数用于非离型化合物离型化合物易产拖尾用于离同异构体 2．液液色谱　 使用特定液态物质涂于担体表面或化键合于担体表面形固定相离原理根据离组流相固定相溶解度同离离程配平衡程 涂布式固定相应具良惰性；流相必须预先用固定相饱减少固定相担体表面流失；温度变化同批号流相区别引起柱变化；另外流相存固定相使品离收集复杂化由于涂布式固定相难避免固定液流失现已少采用现采用化键合固定相C18、C8、氨基柱、氰基柱苯基柱 液液色谱按固定相流相极性同相色谱(NPC)反相色谱(RPC) 相色谱　 采用极性固定相(聚乙二醇、氨基与腈基键合相)；流相相非极性疏水性溶剂(烷烃类已烷、环已烷）加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等调节组保留间用于离等极性极性较强化合物(酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等） 反相色谱　 般用非极性固定相（C18、C8）；流相水或缓冲液加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶机溶剂调节保留间适用于离非极性极性较弱化合物RPC现代液相色谱应用广泛据统计占整HPLC应用80%左右 随着柱填料快速发展反相色谱应用范围逐渐扩现已应用于某些机品或易解离品析控制品析程解离用缓冲液控制流相pH值需要注意C18C8使用pH值通2.5~7.5（2~8）太高pH值使硅胶溶解太低pH值使键合烷基脱落报告新商品柱pH1.5~10范围操作 相色谱与反相色谱比较表 相色谱 反相色谱固定相极性 高～ ～低流相极性 低～ ～高组洗脱序 极性先洗 极性先洗表看极性等相色谱与反相色谱没明显界线（氨基键合固定相） 3.离交换色谱　 固定相离交换树脂用苯乙烯与二乙烯交联形聚合物骨架表面未端芳环接羧基、磺酸基（称阳离交换树脂）或季氨基（阴离交换树脂）离组色谱柱离原理树脂电离离与流相具相同电荷离及测组离进行逆交换根据各离与离交换基团具同电荷吸引力离 缓冲液用作离交换色谱流相离组离交换柱保留间除跟组离与树脂离交换基团作用强弱关外受流相pH值离强度影响pH值改变化合物解离程度进影响其与固定相作用流相盐浓度则离强度高利于品解离导致品较快流 离交换色谱主要用于析机酸、氨基酸、肽及核酸 4.离色谱　 称偶离色谱液液色谱支根据测组离与离试剂离形性离化合物非极性固定相溶解度增使其离效改善主要用于析离强度酸碱物质 析碱性物质用离试剂烷基磺酸盐戊烷磺酸钠、辛烷磺酸钠等另外高氯酸、三氟乙酸与种碱性品形强离 析酸性物质用四丁基季铵盐四丁基溴化铵、四丁基铵磷酸盐 离色谱用ODS柱（即C18）流相甲醇-水或乙腈-水水加入3~10 mmol/L离试剂定pH值范围内进行离测组保间与离性质、浓度、流相组及其pH值、离强度关5．排阻色谱　 固定相定孔径孔性填料流相溶解品溶剂量化合物进入孔滞留间；量化合物能进入孔直接随流相流利用筛量同各组排阻能力差异完离用于离高化合物组织提取物、肽、蛋白质、核酸等